Magnus Ehingers undervisning

— Allt du behöver för A i Biologi, Kemi, Bioteknik, Gymnasiearbete med mera.

Inledning

Allt arbete med DNA måste på något vis börja med att man preparera fram DNA ur en organism. Det finns många olika metoder och recept (se t.ex. laborationen Plasmidpreparation), men de går i princip alla ut på samma sak. Först måste man på något sätt slå sönder cellens membran, så att cellens hela innehåll (inklusive dess DNA) läcker ut i lösningen. Därefter separerar man cellinnehållet från övrigt cellskräp, och slutligen fäller man ut DNA:t ur lösningen. I den här laborationen skall ni preparera fram DNA från banan i en laboration som faktiskt är så enkel att man kan göra den hemma i köket.

Tid för detta

 

Laborationen tar ett labtillfälle i anspråk för preparation av DNA:t. Därefter torkas DNA:t över natten och ytterligare tid (≤ 20 minuter) behövs för att väga upp mängden preparerat DNA.

Material

Varje grupp behöver:

  • Två pasteurpipetter av glas
  • En åttondels banan
  • Filterpapper
  • Våg
  • En gaffel
  • En bägare, 100 ml
  • c:a 15-20 ml 10%-ig diskmedelslösning
  • c:a 1 tsk koksalt (NaCl)
  • Iskall (–20 °C) etanol, 95 % (eller T-röd).
  • 2-3 centrifugrör

Gemensamt behövs:

  • En snabbvåg
  • En inkubator/torkskåp, 37 °C
  • Bordscentrifug

Gör såhär
En hemmagjord glaskrok.

  1. Gör en glaskrok genom att smälta toppen på en pasteurpipett i en bunsenbrännare på så vis, att det bildas en liten krok.
  2. Skär upp en åttondels banan, skala den och väg den. Anteckna vikten.
  3. Lägg bananen i bägaren och mosa den med en gaffel.
  4. Tillsätt 10 % diskmedelslösning tills det täcker, c:a 15 ml. Diskmedlet är en detergent, vilket innebär att den löser upp cell- och kärnmembranen. Därmed slipper hela cellens innehåll – inklusive DNA:t – ut i lösningen.
  5. Tillsätt en tesked koksalt (NaCl) och rör om kraftigt. Den förhöjda saltkoncentrationen minskar DNA-molekylernas löslighet, och gör att de sedan kan fällas med hjälp av etanol enligt nedan.
  6. Fördela den mosade bananen på 2-3 centrifugrör och centrifugera på max. hastighet i 5 minuter.
  7. Väg ett filterpapper och anteckna vikten medan banansörjan centrifugeras
  8. Dekantera av supernatanten i ett nytt provrör (pelleten kan man slänga)
  9. Fyll en pasteurpipett med iskall 95%-ig etanol, och skikta ner den över lösningen i provröret. I gränsen mellan etanolen och DNA-lösningen kommer DNA-trådarna nu att falla ut och bli synliga som vita slöjor i lösningen.
  10. Fiska upp så mycket ni kan utav DNA-trådarna med din glaskrok.
  11. Skrapa av ditt DNA så noggannt som möjligt på filterpappret ni nyss vägt.
  12. Låt filterpappret med DNA:t på torka i 37 °C över natten, och väg därefter igen.
  13. Beräkna utbytet, d.v.s. hur många gram DNA ni lyckades preparera fram per gram banan!

Frågor att besvara

  1. Vilket utbyte fick ni?
  2. Vilka faktorer gjorde så att utbytet inte blev högre?

Riskanalys

Laborationen är inte riskfylld.